
Stbl3感受態細胞
運輸與保存方法:干冰運輸
保存溫度:-80°保存
操作說明:
1. 取 100μl 冰上融化的Stbl3感受態細胞,加入目的質粒并輕輕混勻,冰上 靜置 25 分鐘。Stbl3感受態細胞 10×100μl pUC19(control vector) 10pg/μl
2. 42℃水浴熱激 45 秒,迅速放回冰上并靜置 2 分鐘,晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入 700μl 不含抗生素的無菌培養基(2YT 或 LB),混勻后 37℃,200rpm 復蘇 60 分 鐘。
4. 5000rpm 離心一分鐘收菌,留取 100μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的 2YT 或 LB 培養基上。
5. 將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養。
注意事項:
1. 感受態細胞在冰上融化。
2. 混入質粒時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質??上鄳獪p少終用于涂板的菌量。
4. 誘導時,IPTG 濃度可選(0.1-2mM 均可)。
5. 為獲得需要量的蛋白,誘導時間,溫度,IPTG 濃度需實驗者優化。 Sample Induction Protocol (for reference only)
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