如何用PCR直接檢測基因內缺失?今天就讓我們帶著這個問題一起來了解一下吧。
當基因內缺失時,可用已知的該基因DNA序列在缺失片段的兩側設計一對引物,然后進行PCR,對其產物行瓊糖凝膠電泳,溴乙錠染色,紫外檢測儀下檢測有無特異性的擴增產物,即可非常容易的判斷待檢稱本中有無dna片段的缺失.
1.一對引物PCR檢測缺失如果一個基因的DNA序列已經清楚,其缺失部位亦較為固定,即可根據缺失發生區域的DNA序列在缺失片段的兩側合成一對合適的引物進行PCR,然后瓊脂糖凝膠電泳及溴乙錠染色,短波紫外燈下觀察有無特異性的擴增片段,該方法是檢測基因片段缺失最為快速的方法,在實際應用中,為了避光因某些原因引起的擴增失敗而導致假陰性結果的出現,常在反應體系中加入一對與缺失片段無關的基因引物,同時加以擴增,以確定無特異性擴增帶并非因反應體系的原因的引起。
如在應用PCR技術進行X地貧Bartα基因胎兒水腫綜合征義基因缺失檢測時,常用一對引物擴增缺失區域,同時同一對β基因引物擴增β基因的一個片段,然后電泳檢測。
若同時即有α和β基因的特異性擴增產物,則說明α基因的擴增產物則說明模板DNA中有α基因的缺失,為Bart胎兒水腫綜合征.
2.多對引物的多重pcr檢測缺失:對于某些遺傳病的致病基因來說,其缺失具有明顯的異質性,即在不同患者其缺失片段有所不同,因而難以用一對缺失部位的引物將所有的缺失檢出,在這種情況下,我們可設計多對引物檢測該基因的不同外顯子區域,即用同一PCR體系擴增多個外顯子然后用瓊糖凝膠電泳檢測有無缺失的片段,若某一特異性的擴增產物帶缺如,則可判定為該片段的缺失,該檢測方法是對已知結構基因有無缺失片段的最快速可行的檢測途徑,目前已用于多種遺傳病基因缺的檢測。
如在DMD/BMD缺失型突變的檢測中,用23對引物分為三組進行多重PCR可改98%的缺失得以檢出,另外還有人用9對物進行兩組多重PCR,大約可檢出DMD/BMD92%的缺失型突變.
3.用PCR技術進行雜合性丟失的檢測:有報道,PCR技術尚可用于檢測雜合性丟失可采用PCR-SSCP及PCR定量技術進行檢測.